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熒光素酶報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀（化學(xué)發(fā)光儀）測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。雙熒光素酶體系，即有兩種熒光素酶，比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，螢火...

【實驗方法與步驟】（1）細胞凋亡的誘導(dǎo)：HeLa細胞常規(guī)傳代培養(yǎng)至對數(shù)生長期(見細胞傳代培養(yǎng)）。實驗組細胞加入順鉑溶液（生理鹽水配置）至終濃度為20μmo1/L,37℃，5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)?？瞻讓嶒瀸φ占尤氲润w積的生理鹽水，同樣條件繼續(xù)培養(yǎng)。24h后進行染色及形態(tài)學(xué)觀察。（2）胰酶消化細胞，將培養(yǎng)基上清及消化下來的細胞一同轉(zhuǎn)入離心管中600~800r/min離心10min。（3）吸去上清，用1mLPBS重懸細胞沉淀，并轉(zhuǎn)入1.5mL微量離心管中，600~800r/min...

微孔濾膜培養(yǎng)小室及雙室聯(lián)合培養(yǎng)系統(tǒng)（Transwell實驗）：應(yīng)用微孔濾膜培養(yǎng)小室，進行膠質(zhì)瘤細胞與內(nèi)皮細胞的聯(lián)合培養(yǎng)，可以更接近體內(nèi)環(huán)境，模擬瘤細胞對血管內(nèi)皮細胞的作用，濾膜上8μm的微孔可允許內(nèi)皮細胞穿過到達膜的下面，這些穿越遷移的內(nèi)皮細胞可粘附于膜的下面，通過計數(shù)濾膜下面的細胞可基本反映細胞的遷移情況。Transwell的基本原理是將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱為上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱為下室，上室內(nèi)添加上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)添加下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以膜相隔。將...

一、實驗原理各種細胞操作，包括傳代、凍存和原代組織的分離，均能導(dǎo)致細胞死亡。為了確定群體細胞中的存活細胞數(shù)，可采用臺盼藍染料排斥實驗（Phillips1973)。正常的健康細胞能排斥染料，但細胞膜完整性喪失后臺盼藍可彌散入細胞內(nèi)。染料排斥實驗是一種粗糙的估計細胞活力的方法，無法區(qū)別10%~20%的活力差異。除此之外，排斥染料的細胞有可能不貼壁或不能較長時問生存或繁殖。二、實驗方法1)胰蛋白酶處理細胞，無菌狀態(tài)下取0.5ml細胞用PBS稀釋至每毫升2X105~4X105。2)向...

一、細胞轉(zhuǎn)染細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩大類。本實驗室主要是質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、miRcroRNA轉(zhuǎn)染、慢病毒轉(zhuǎn)染、藥物轉(zhuǎn)染、多肽轉(zhuǎn)染等。二、miRcroRNA轉(zhuǎn)染（一）實驗材料及試劑六孔板、CO2培養(yǎng)箱、EP管、酒精燈等；無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細胞等。（二）實驗內(nèi)容1當六孔板中MSC細胞密度達90％時，準備轉(zhuǎn)染，將無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM取出...

流式細胞術(shù)檢測細胞周期1。實驗原理用流式細胞儀檢測細胞周期，通常用碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染細胞核。PI在一定波長的光下發(fā)出熒光，其強度與DNA含量成正比。通過流式細胞儀分析各時期的細胞百分數(shù)，可檢測細胞的增殖、凋亡。2。流式細胞儀檢測A549細胞周期步驟收集對數(shù)生長期細胞，計數(shù)，以(1~5)×105/孔接種于6孔板，置37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細胞貼壁。次日更換培養(yǎng)液，各孔分別加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同濃度茶...

1、炎癥灶內(nèi)主要是巨噬細胞、淋巴細胞和漿細胞浸潤。單核吞噬細胞的浸潤對慢性炎癥十分重要。單核細胞從血管游出后轉(zhuǎn)化為巨噬細胞。巨噬細胞還可被激活。在炎癥灶局部巨噬細胞的積聚有三方面的原因：①由于從炎癥灶不斷產(chǎn)生吸引單核細胞的趨化因子，如C5a、纖維蛋白多肽、陽離子蛋白質(zhì)及膠原和纖維粘連蛋白的分解產(chǎn)物等。因此，從血液循環(huán)中滲出的單核細胞源源不斷來到局部，這是局部巨噬細胞的主要來源。②游出的巨噬細胞在局部通過有絲分裂而增殖，但巨噬細胞局部增殖的起始動因還不清楚。③炎癥灶內(nèi)的巨噬細胞...